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    干货满满/走进ELISA之ELISA原理知多少?

    阅读次数:372  发布时间:2022/10/10 22:37:45

    引言:

                   ELISA是酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbnent Assay)的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。自上世纪70年代提出ELISA技术以来,数年来凭借较高的灵敏度和高通量性,已被广泛应用于免疫学、微生物学、寄生虫学等。

     

    基本原理:

              ELISA是将抗原、抗体的免疫反应和酶的高校催化反应有机结合而发展起来的一种综合性技术。主要方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,然后利用酶标记的抗体或抗原与之孵育,加入显色剂显色,通过酶标仪测定待测物颜色与标准物颜色的差异,绘制出酶活曲线得出待测物浓度。

    四种常见的ELISA方法:

    1.直接ELISA
    检测抗体常用的方法(对于病原体抗体检测和诊断)。

    2.间接ELISA
    间接法常用于检测抗体。将抗原固定于固相载体上。先加入检测抗体与抗原特异性结合,随后加入酶标二抗检测并利用底物显色,通过颜色深浅进行结果判读。
    3.双抗体夹心ELISA
    检测抗原常用的方法(检测各种蛋白质大分子抗原)。将抗体固定在固相载体上。先加入待测抗原与抗体特异性结合,随后加入酶标抗体检测并利用底物显色。
    4.竞争ELISA
    竞争法既可以用于检测抗体,也可以用于检测抗原。以检测抗体为例,将抗原固定在固相载体上。先加入待检抗体,再加入酶标抗体,则待检抗体就与酶标抗体竞争结合包被在固相载体上的抗原。通过洗涤洗掉未被竞争结合的酶标抗体,后加底物显色,需要注意的是显色结果与待检抗原(或抗体)的量成反比。(适用于检测特异性抗体;抗原中有不易去除的干扰物)

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